A aplicação de ELISA digital ultrassensível para p24 permite uma melhor avaliação do HIV

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 10958 (2023) Citar este artigo

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O advento da terapia antirretroviral combinada (TARc) tem sido fundamental no controle da replicação e transmissão do HIV-1 e na diminuição da morbidade e mortalidade associadas. No entanto, a TARVc por si só não é capaz de curar o VIH-1 devido à presença de células imunitárias de longa duração e infectadas de forma latente, que re-semeiam a viremia plasmática quando a TARVc é interrompida. A avaliação das estratégias de cura do HIV usando métodos de cultura ex vivo para uma melhor compreensão da diversidade do HIV reativado, do crescimento viral e da dinâmica de replicação é aprimorada usando ELISA digital ultrassensível baseado na tecnologia de matriz de molécula única (Simoa) para aumentar a sensibilidade da detecção de endpoint . Em ensaios de crescimento viral (VOA), demonstrou-se que o crescimento exponencial do VIH-1 depende do tamanho inicial da explosão do vírus, ultrapassando um limiar de crescimento crítico de 5100 cópias de ARN do VIH-1. Aqui, mostramos uma associação entre concentrações ultrassensíveis de HIV-1 Gag p24 e número de cópias de RNA do HIV-1 que caracterizam a dinâmica viral abaixo do limiar de replicação exponencial. O sequenciamento de genoma único (SGS) revelou a presença de múltiplas sequências idênticas de HIV-1, indicativo de replicação de baixo nível ocorrendo abaixo do limiar de crescimento exponencial no início de uma VOA. No entanto, a SGS revelou ainda diversas variantes relacionadas do VIH, detectáveis ​​por métodos ultrassensíveis, que não conseguiram estabelecer um crescimento exponencial. No geral, nossos dados sugerem que o crescimento viral que ocorre abaixo do limiar necessário para estabelecer o crescimento exponencial na cultura não exclui a competência de replicação do HIV reativado, e a detecção ultrassensível do p24 do HIV-1 pode fornecer um método para detectar variantes anteriormente não quantificáveis. Estes dados apoiam fortemente a utilização da plataforma Simoa numa abordagem multifacetada para medir a carga viral latente e a eficácia de intervenções terapêuticas destinadas à cura do VIH-1.

Embora a terapia antirretroviral combinada (TARc) controle a replicação do vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) e retarde em grande parte a progressão da doença, a adesão ao regime de TARc prescrito ao longo da vida é necessária devido à presença de reservatórios virais de longa vida, capazes de ressurgir quando a terapia é interrompida1,2,3,4,5. Este reservatório é estabelecido muito cedo na infecção, amplamente disperso pelos tecidos linfóides do corpo, e continua a ser uma barreira importante à erradicação do VIH-16. As células T CD4+ em repouso são um tipo de célula bem caracterizado que contém uma porção do reservatório latente do HIV. Vários ensaios clínicos estão actualmente a investigar os efeitos dos agentes de reversão da latência e da expansão imunitária anti-HIV na depuração destas células7,8.

Para determinar a eficácia das estratégias de cura do HIV-1, a medição precisa da frequência de células infectadas latentemente é de extrema importância. Os ensaios convencionais baseados em PCR oferecem maior velocidade de processamento e sensibilidade do ensaio em relação aos métodos de crescimento ex vivo, mas são incapazes de distinguir entre reservatórios competentes que podem se recuperar em um indivíduo e aqueles que não podem9,10,11. Recentemente, vários grupos relataram melhorias na detecção de genomas provirais intactos utilizando múltiplos iniciadores e sondas em partes conservadas do genoma viral . No entanto, estima-se que 30-40% dos vírus amplificados por este método ainda possam estar defeituosos, em parte devido a polimorfismos de sequência que limitam o sucesso da amplificação do provírus intacto . No outro extremo estão os métodos baseados em cultura, como o ensaio quantitativo de crescimento viral (QVOA), que é considerado o padrão ouro para a detecção de vírus competentes para replicação. No entanto, o interrogatório do QVOA revelou que ele subestima o verdadeiro tamanho do reservatório latente devido a uma porção de provírus que permanece não induzida após uma única rodada de estimulação celular .